為您推薦:
中國儀器網 中國儀器網 基因擴增儀 實時熒光定量PCR

網站地圖

實時熒光定量PCR

實時熒光定量PCR (Quantitative Real-time PCR)是一種在DNA擴增反應中,以熒光化學物質測每次聚合酶鏈式反應(PCR)循環后產物總量的方法。通過內參或者外參法對待測樣品中的特定DNA序列進行定量分析的方法。下面就讓小編為你具體介紹一下。


實時熒光定量PCR

傳統定量只能終點檢測的局限通過實時熒光定量PCR技術有效地解決了。每一輪循環均可檢測一次熒光信號的強度被實現了,并且在電腦軟件之中記錄,通過對每個樣品Ct值的計算,根據標準曲線獲得定量結果。因而,實時熒光定量PCR之所以無需內標是因為其建立在兩個基礎之上的:


24.jpg


1)Ct值與起始模板的線性關系

因為Ct值與起始模板的對數存在線性關系,,能夠利用標準曲線定量測定未知樣品。所以,實時熒光定量PCR是一種采用外標準曲線定量的方法。

和內標法相比,外標準曲線的定量方法更科學,更準確、更值得信賴。迄今為止,已得到全世界的公認,定量最準確,重現性最好的定量方法就是外標準曲線的實時熒光定量PCR。


2)Ct值的重現性

當PCR循環在到達Ct值所在的循環數時,真正的指數擴增期(對數期)剛剛進入,這個時候,誤差尚未放大,仍很微小,所以

Ct值的重現性極好,也就是說,無論是同一時間不同管內擴增,還是同一模板不同時間擴增,得到的都是恒定的Ct值。


實時熒光定量PCR在基因表達研究、轉基因研究,藥物療效考核、病原體檢測等諸多領域得到廣泛地應用。


實時熒光定量PCR的定量方法

在Real-timePCR中,模板定量有相對定量和絕對定量兩種策略。


優勢

Ct值(限制點的循環數)指的是樣品到達域值水平所經歷的循環數。為了使獲得的數據最準確,可重復,域值應設定在使指數期的擴增效率為最大。若標有相應濃度的標準品同時擴增,一條可以用來計算未知樣品的濃度的標準曲線將由線性回歸分析產生。


在“Torsch”診斷中的應用

在妊娠早期(1-3個月),胎兒容易因為感染某些病原微生物而畸形,有弓體(TOX)、風疹病毒(RV)、單純皰疹病毒(HSV)、沙眼衣原體(CT)、及巨細胞(HCMV)是這些病原體中最常見的。對這幾種病原體的檢測按照它們的英文詞首簡稱為Torsch試驗。


2019-06-14 17:16:54 瀏覽次數:81次
3d返奖率历史记录百度