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PCR擴增依據

按照DNA變性,復性原理設計出了DNA的PCR擴增,DNA的變性,復性原理如下,就讓小編帶你了解一下吧。


變性

核酸雙螺旋堿基對的氫鍵斷裂,雙鏈變為單鏈,從而改變了核酸的天然構造和性質。變性時維持雙螺旋穩定性的氫鍵斷裂,破壞了堿基間的堆積力,然而一級結構的改變沒有被涉及。如加熱、極端的pH、有機試劑甲醇、乙醇、尿素及甲酰胺等所有能破壞雙螺旋穩定性的因素都能夠造成核酸分子變性。


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變性DNA的一些理化及生物學性質常常發生改變:

1)增色效應(hyperchromic effect)

變性后DNA溶液的紫外吸收作用增強的效應,被稱為增色效應(hyperchromic effect)。DNA分子由于DNA分子中堿基間電子的相互作用而具有了吸收260nm波長紫外光的特性。在DNA雙螺旋結構中,堿基藏于內側,變性時,DNA雙螺旋解開,于是堿基外露,堿基中電子的相互作用對紫外吸收很有幫助,所以產生增色效應。


2)溶液旋光性發生改變。

變性后,改變了DNA分子局部的構造和對稱性,從而使DNA溶液的旋光性發生變化。 


3)溶液粘度降低。

DNA雙螺旋是緊密的剛性結構,變性后變成了柔軟而松散的無規則單股線性結構,所以DNA粘度明顯地下降了。


復性

在適當條件下,指變性DNA二條互補鏈全部或部分恢復到天然雙螺旋結構的現象,它是變性的一種逆轉過程。熱變性DNA一般經緩慢冷卻后即可復性,此過程稱之為" 退火"(annealing)。溫度以及DNA自身特性等其它因素都會對DNA的復性產生影響。

當變性DNA溶液溫度低于Tm時,維持25℃的溫度較長的一段時間,吸光率會逐漸降低。維持在Tm以下較高溫度,更有利于復性。降溫時間太短以及溫差大均不利于復性。


2019-06-14 14:59:53 瀏覽次數:119次

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