為您推薦:
中國儀器網 中國儀器網 基因擴增儀 PCR擴增產物分析

產品導購地圖

PCR擴增產物分析

PCR對DNA片段進行擴增僅僅是一個重要的手段。目的是為了檢測和分析擴增片段。分析法的選用取決于研究的對象和研究的目的。擴增產物的大小可以通過瓊脂糖凝膠電泳的判斷,其對鑒定擴增產物有所幫助。點雜交不僅可以對擴增產物進行鑒定,而且還能幫助產物的分型。特異產物的大小通過Southern雜交分析能夠從非特異擴增產物中被鑒定出來。如PCR-ELISA,PCR-EIA,PCR-OLA等最近發展的一系列產物分析法均對產物的精確分析有所幫助。


1.PCR-ELISA

這種方法沒有電泳和雜交的步驟,適于常規ELISA記數儀檢測。猶豫5'端修飾后依然能夠對特異靶序列進行常規PCR擴增,所以,可以通過修飾一個引物的5′端使其攜帶便于PCR產物固定的功能基因,而通過另一引物5′-端的修飾使產物便于檢測。


21.jpg


2.微孔板夾心

這種方法是通過PCR產物的某一區域和固定在微孔板的捕獲探針特異雜交在微孔板上間接地固定產物。然后,再用PCR產物的另一區域和非放射性標記物標記的檢測探針雜交,漂洗后顯色即可判斷結果,這種方法是檢測一個產物需要兩個雜交過程,所以,和一次雜交的檢測法相比,兩次雜交的特異性更加的高。這種方法和PCR 32P探針的Southern雜交法有著不相上下的敏感性和特異性。然而PCR微孔板夾心雜交法操作更加的迅速,簡單,使同位素標記探針的危害得以避免。其非常適用于常規臨床實驗。


3.凝膠電泳

瓊脂糖凝膠或聚丙烯酰胺凝膠電泳能夠有助于檢測PCR產物,最常用的是瓊脂糖凝膠電泳,擴增產物的大小能夠通過電泳判斷出來。在臨床檢測中,檢測的需要只通過凝膠電泳判斷擴增片段大小就能夠得到滿足。將1.5g瓊脂糖加入100mlTBE,在微波鍋內溶解,稍稍冷卻后倒入電泳槽,這是通常的制膠方法。

電泳后,用溴化乙淀染色20min,然后用去離子水漂洗2次,每次15min,在UV燈下觀察結果并拍照。

凝膠電泳除了能夠用來對產物的大小進行鑒定和擴增的情況進行檢測以外,還能夠對擴增產物進行純化。


4.點雜交

若擴增產物是多條帶,則更合適的方法為點雜交。這種方法的基本過程為:首先,在尼龍膜或硝酸纖維素濾膜上固定好擴增的DNA,再使用放射性或非放射性標記物標記的探針雜交。點雜交對突變DNA的突變類型檢測也有幫助,可以被用來分型某些基因和診斷人類遺傳病。放射性同位素32P標記的寡核苷酸探針檢測具有敏感性、特異性和可靠性。對人們認識某些疾病與基因變異的關系起了很大的作用。然而因為同位素不穩定且具有放射性,不能夠在常規的臨床或法醫檢驗中使用。更加安全且方便的方法是用非放射性物質(生物素、熒光素和地 高 辛等)標記的寡核苷酸探針分析PCR產物以確定核酸序列變異。非放射性標記物質不但穩定性高,而且使用方便、安全、檢測速度快。


2019-06-14 14:54:03 瀏覽次數:186次
熱門標簽: PCR的常見問題PCR陰性
延伸閱讀

看過該文章的人還看了以下文章

3d返奖率历史记录百度