為您推薦:
中國儀器網 中國儀器網 基因擴增儀 PCR的常見問題

網站地圖

PCR的常見問題

聚合酶鏈式反應簡稱PCR(Polymerase Chain Reaction) (又稱:多聚酶鏈式反應) PCR是體外酶促合成特異DNA片段的一種方法,由高溫變性、低溫退火(復性)及適溫延伸等反應組成一個周期,循環進行,使目的DNA得以迅速擴增,具有特異性強、靈敏度高、操作簡便、省時等特點。下面就讓小編為大家介紹一下PCR的常見問題以及醫療應用。


PCR的常見問題

為什么完全沒有PCR擴增產物?

1.在加樣的時候出現失誤或者試劑的質量出現問題,從而造成反應體系不完整。

2.在反應體系里存在聚合酶抑制劑或者聚合酶失活。

3.PCR基因擴增儀的的溫度沒有得到精確的控制。

4.模板DNA發生降解。

5.引物或反應溫度設計不合理。

6.靶片段有過高的GC含量或者擴增對象的長度過長。


21.jpg


為什么會有多條非特異性條帶出現?

1.反應體系受到污染。

2.引物的特異性不是很好。

3.沒有選擇合適的退火溫度


為什么PCR產物很少?

1.聚合酶活性過低。

2.循環次數偏低。

3.模板DNA濃度過低。


為什PCR產物出現片狀拖尾?

1.DNA聚合酶過多或者酶活性過低。

2.dNTP和鎂離子的濃度過高。

3.退火溫度過低,循環次數過多。

4.模板DNA不純或者模板DNA用量過大。

5.引物的特異性不是很好,引物間形成二聚體造成非特異性擴增。


醫療應用

1.病原體檢測

目前,采用熒光定量PCR檢測技術能夠定量測定淋球菌、沙眼衣原體、解脲支原體、人類乳頭瘤病毒、單純皰疹病毒、人類免疫缺陷病毒、肝炎病毒、流感病毒、結核分枝桿菌、EB病毒和巨細胞病毒等病原體。熒光定量PCR檢測技術靈敏度高、取樣少、快速簡便。


2.產前診斷

直到現在人們依然無法治療遺傳性物質改變引起的遺傳性疾病,只能通過產前監測,減少病嬰出生,對各類遺傳性疾病的發生的預防,使用實時熒光定量PCR檢測無創傷,易被接受。


3.腫瘤基因檢測

實時熒光定量PCR不但能有效地檢測到基因的突變,而且可以準確檢測癌基因的表達量。隨著與腫瘤相關的新基因的不斷發現,熒光定量PCR技術將會在腫瘤的研究中發揮更大的作用。


2019-06-14 14:43:30 瀏覽次數:60次
延伸閱讀
3d返奖率历史记录百度